作者：双胍

2021年2月28日，传奇生物的CAR-T细胞产品CARVYKTI（ciltacabtagene autoleucel）获得FDA批准，成为在美国上市的第6个CAR-T药物。2022年3月15日，FDA颁布《Considerations for the Development of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cell Products》草案，目的是就CMC（化学、生产和控制）、临床前（药理学和毒理学）以及临床研究设计提供针对CAR T细胞产品建议，虽然该指南专门针对CAR T细胞产品，但其中提供的许多信息和建议也适用于其他转基因淋巴细胞产品，如自然杀伤（NK）细胞或T细胞受体（TCR）修饰的T细胞。

现有生物制品框架下，CAR T细胞产品作为基因治疗（GT）产品受FDA监管。FDA认识到，CAR T细胞产品的开发、生产、检测和临床评估都极具挑战性。对CAR转基因和载体进行仔细设计和适当测试，对产品的安全性、特异性和功能都至关重要。CAR T细胞产品生产涉及多种生物材料和复杂的多步骤程序，这些都是产品批次间差异的潜在来源。因此，对生产过程的控制以及适当的过程测试和批次放行测试对于确保CAR T细胞产品的安全性、质量和一致性至关重要。此外，在产品开发过程中，生产过程变更也很常见。了解这些变更对产品质量的影响至关重要。全面的产品特性研究对于识别相应的关键质量属性（CQA）很有价值，这些属性可以在生产中和批次放行时进行评估，也可以用于可比性和稳定性研究。然后可通过工艺鉴定确定关键工艺参数（CPP），以确保生产批次始终符合CQA。GT产品生产和测试的一般注意事项可参考2020年1月颁布的FDA指南《Chemistry, Manufacturing, and Control (CMC) Information for Human Gene Therapy Investigational New Drug Applications (INDs)》。首先，FDA简要概述了CAR T细胞设计和开发的关键考虑因素。

A、 CAR构建

CAR通常包含两种类型结构域：识别抗原和传导信号启动T细胞活化。

FDA建议申请人评估每个结构域与其靶抗原特异性结合的能力。许多抗原识别结构域衍生自鼠单克隆抗体，可能在人体中具有免疫原性，导致CAR T细胞排斥或其他安全风险（例如过敏反应）。如果使用降低免疫原性的方法（例如通过移植互补决定区进行“人源化”），建议在IND中描述这些变化及其对靶标结合和生物活性的影响。

FDA建议彻底演示信号结构域的功能，例如，应评估跨膜结构域、铰链区和用于分隔不同功能区的连接区贡献，因为这些可能影响CAR T细胞特异性和活性。

B、载体

FDA建议对包括整合载体的产品进行长期随访，因为整合载体可能会增加延迟不良事件的风险。对于非整合型载体，则认为延迟不良事件的预测风险低，且通常不需要长期随访。

除CAR外，载体还可表达其他功能元件。例如，载体可以表达在生产期间用于选择或富集细胞亚群的其他功能元件；修改T细胞持久性和/或活性；或选择性体内消融CAR T细胞（“自杀基因”）。值得注意的是，每个额外的功能元件可能会影响CAR T细胞的安全性和有效性。FDA建议申请人提供理由和相关数据来以支持纳入其他元件。理由应包括评估这些额外元件对CAR T细胞特异性、功能性、免疫原性或安全性的任何影响。FDA建议载体中不应包含不必要的转基因。对于产品生物学功能不必要的转基因序列可能在体内具有免疫原性或对产物持久性或活性具有其他意想不到的影响。

C、细胞起始材料

生产CAR T细胞产品的起始材料通常从患者（自体产品）或健康供体（同种异体产品）的白细胞单采获得。自体和异体产品的安全性和监管考虑因素不同。由于对先前用的CAR T细胞缺乏应答、复发或治疗不同的恶性肿瘤，先前接受过CAR T细胞的患者可考虑使用不同CAR T细胞的临床研究。用来自先前接受过CAR T细胞患者的细胞起始材料生产的CAR T细胞可能不同于用来自未接受CAR T细胞患者生产的同类型的CAR T细胞。之前使用过CAR T细胞可能对生产CAR T细胞的效力、体内扩增、安全性和功效具有意想不到的影响（例如，扩增或转导速率）。因此，可能需要评估细胞起始材料中先前用的CAR T细胞水平。

此外，由于增加载体整合频率相关风险，CAR T细胞测试应包括评估最终产品中新引入的和先前用的CAR T细胞载体拷贝数（VCN），如果先前用的CAR T细胞是可检测的。如果自体CAR T细胞临床研究将招募先前接受过CAR T细胞的患者和未接受过CAR T细胞的患者，则应在临床研究设计中评估和考虑CAR T细胞的潜在差异。申请人还应考虑特定患者是否仍有资格接受额外CAR T细胞治疗所需的辅助治疗，包括另一种非骨髓肃清预备方案，如化疗或全身放疗，这可能会对先前接受过大量治疗的患者造成危及生命的骨髓肃清风险。

FDA建议申请人在提交IND之前，作为pre-IND会议的一部分，与OTAT讨论产品特性、测试、剂量和临床研究设计等考虑因素。

D、新鲜或冷冻保存的最终产品

新鲜CAR T细胞保质期有限。FDA建议制剂和输注之间的最长时间由稳定性研究定义和支持。另外，可以执行放行检测的时间范围是有限的。因此，开发和执行设计良好的物流至关重要，其中可能包括：批次放行的采样和检测时机；报告批次放行的质控（QC）测试结果和质量保证（QA）审核；安排产品运输；以及在临床现场接收和处理新鲜产品。

另一方面，冷冻保存有足够时间进行完整放行检测，并灵活安排患者输注。当CAR T细胞在中心生产场地生产运送到临床点进行给药时，FDA通常建议冷冻保存。对于冷冻保存的CAR T细胞，应评估与输注冷冻保护剂相关风险，并且产品在临床的受控解冻可能对维持产品质量至关重要。无论配方如何，都应该有适当程序来确保在运送到临床点期间对CAR T细胞的充分控制。这些程序应在IND中进行描述，在开始临床研究前就位，并在上市前进行验证。

FDA对CMC的建议

在这个部分，FDA就如何撰写CTD提交IND，产品生命全过程各关键节点的检测项和验收标准，以及如何应对开发阶段的生产变更做出了详细说明。我国企业可以结合我国2017年12月食药监总局颁布的《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则（试行）》、2018年6月中检院颁发的《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》综合决定如何对CAR-T细胞治疗产品在不同研发阶段进行质量控制，保障产品全生命周期安全、有效和质量可靠。

FDA要求申请人以通用技术文件（CTD）格式组织信息，载体的CMC信息在原料药（DS）部分中描述，CAR T细胞信息组织进独立的DS部分和独立的制剂（DP）部分中。当使用连续工艺制造CAR T细胞，如果DS和DP之间没有明确区分，FDA建议在CTD模块2中的摘要信息中加以解释，以支持DS/DP划分。

CMC在所有开发阶段的重点都是产品安全和生产控制。FDA建议按生命周期方法开发CAR T细胞，在产品开发过程中收集信息，并以适当方式提交。IND中提交的CMC信息量取决于临床研究的阶段和范围。因此，可能不需要在初始IND提交中完成所有CTD部分。类似地，CAR T细胞和载体应在适用于开发阶段的良好生产规范（GMP）条件下生产。为使产品开发与临床开发保持一致，可能需要额外的CMC信息，尤其是当临床在加速开发计划下进展迅速时。

对于处于临床研发早期阶段的CAR T细胞，极少规范是最终确定的，一些测试可能仍在开发中。早期研究中收集的细胞特征数据可以为后期开发中使用的放行标准提供信息，以确保产品和工艺的一致性。因此，特性研究对于支持产品开发和可比性评估至关重要。对于主要目的为收集有关产品功效有意义数据的研究，FDA建议完善验收标准，以确保批次定义明确且始终如一的生产。

A.载体生产和检测

GT CMC指南为载体的生产和检测提供了建议。在开始临床研究之前，应充分描述载体特征。申请上市，必须根据CGMP标准生产载体，并且必须分析方法需验证。在CAR T细胞生物制品许可申请（BLA）审查期间，载体生产设施将接受检查。

载体质量直接影响CAR T细胞质量和一致性。FDA建议申请人描述载体结构、主细胞库和工作细胞库的表征和测试、参考物质的表征、载体生产和检测以及载体稳定性。载体批次放行检测应包括安全性、鉴定、纯度和效价的测量。评估转基因生物活性的效价测定可配合CAR T细胞效价测定开发。仅将转基因表达作为效价的衡量标准可能足以支持早期IND研究；然而，为了提供有效性初步证据以支持上市申请，临床研究可能需要额外的生物效价测量。此外，FDA建议载体批次放行测试包括检测载体浓度，为了正常化CAR T细胞生产过程中用于转导的载体数量。例如，FDA建议在合适的细胞系或健康的供体细胞中检测每mL病毒载体的转导单位。随后，优化T细胞转导以确定每个细胞需要加入的载体量，以达到CAR T细胞制剂中CAR阳性细胞的目标百分比。

载体安全性检测应包括微生物测试，如无菌、支原体、内毒素和外源性试剂测试，以确保CAR T细胞制剂不被污染。根据所用的转基因载体类型，可能建议进行额外检测。例如，基于逆转录病毒的载体涉及额外的安全问题。患者是否需要长期随访通常取决于与载体相关的安全问题和载体整合的倾向。

B.细胞起始材料的收集、处理和测试

用作起始材料的细胞的性质可能对CAR T细胞的质量和功能至关重要。由于患者或供体差异，细胞起始物质可能是批次间变异性的主要来源。以从白细胞分离获得的起始材料为例，描述细胞起始材料的考虑因素。该建议也适用于其他类型的细胞起始材料。

FDA建议从收集到生产前阶段，处理白细胞分离起始材料所用的工艺如GT CMC指南V.A.2.c.ii部分所述，应包括任何清洗步骤或冷冻保存程序。在所有白细胞分离收集地点都实施这些程序，以确保工艺质量，包括细胞处理和运输到生产现场。制定适当程序以确保在运输至生产设施的过程中充分控制白细胞分离起始材料（例如温度控制），并应提供有关运输容器和温度监测的信息。上市申请应包括运输过程和冷冻保存步骤的验证，包括在预期条件下对白细胞分离起始材料稳定性的评估。

通过建立用于CAR T细胞生产的白细胞分离起始材料的验收标准，可以提高制造成功概率。例如，可以指定最少细胞数、活力和CD3+细胞百分比。FDA建议在开始CAR T细胞生产前，测试白细胞分离起始材料的微生物污染（例如无菌或生物负载），或者在DP无菌测试失败的情况下，保留一个样本进行后期测试。

白细胞分离起始材料的附加特性（例如，CD4+和CD8+ T细胞、NK细胞、单核细胞、B细胞的百分比和绝对数量）可能会影响CAR T细胞的生产工艺，因为这些特性可能会影响T细胞的选择和扩增以及最终的CAR T细胞质量。

自体白细胞分离起始材料不需要捐赠者资格确定、筛查或测试。另一方面，异基因白细胞分离起始材料确实需要根据21 CFR 1271 C确定捐赠者资格，并对相关传染病病原体进行筛选和测试。GT CMC指南V.A.2.c.ii讨论了来源于异基因细胞或组织的细胞库的测试建议。

为了维护身份链（COI），必须记录从收集到CAR T细胞管理的材料标签和跟踪。此外，FDA建议标签至少包括两个唯一标识符，并在每个处理步骤之前在批记录中内置标签检查。COI还应保存在临床现场，并在床边进行两次独立的患者和标签检查。

C.CAR T细胞生产和检测

CAR T细胞生产是一个复杂的过程，应根据目标产品简介进行定制。GT CMC指南中说明了生产体外修饰细胞（包括CAR T细胞）的建议：早期产品表征（IV.A）、杂质特性（V.A.3.b.i和ii）、生产工艺开发（V.A.2.f和V.B.2.c）和设施考虑（V.C.1）。本指南为CAR T细胞生产和检测提供了具体建议和额外细节。

1. CAR T细胞生产工艺控制

多步骤生产工艺可能是变异性的一个来源，加上细胞起始材料特有的供体间变异性。为了最大限度地减少变异性并促进CAR T细胞批次间的一致性，FDA建议对生产工艺进行良好控制，可以通过使用优质材料、CPP的过程中控制、过程中测试以及CQA中间体和最终产品的测试来实现。

CAR T细胞生产通常需要专门的辅助材料，包括选择试剂、激活试剂、抗体、细胞因子、血清和生长因子。根据来源或供应商等因素，此类材料的安全性和质量可能存在很大差异。例如，FDA建议人类或动物源性成分不要来自可能存在病毒和/或传染性海绵状脑病（TSE）病原体污染的地区，并建议对成分进行适当的外源性检测。试剂的批间变异性和稳定性也可能存在问题，建议申请人通过供应商和来料资格认证计划，包括检疫、分析证书（COA）和原产地证书（COO）评估、目视检查和测试（视情况而定），对辅助材料的质量、安全性和效力进行资格认证。

为确保产品安全，CAR T细胞应无存活的污染微生物；然而，最终DP不能进行终端灭菌，因为细胞需要完全存活和功能。因此，在当前良好生产规范（CGMP）条件下，应使用经验证的无菌工艺进行生产。根据美国药典（USP）71，使用无菌测试或适当的，合格的和经验证的检测方法，进一步支持产品安全性。

IND应证明通过开发或工艺批次生产，按照拟定的制造工艺生产CAR T细胞的能力。为了支持工艺开发，申请人可以交叉来自同一工厂高度相关的CAR T细胞生产的参考信息（例如，相同的生产工艺，但有不同的CAR构造）。一般来说，来自健康捐赠者的起始材料适用于生产工艺开发批次。然而，由于疾病状态、先前治疗或其他患者固有特征，患者来源的起始材料可能具有影响CAR T细胞生产的固有特性。因此，在某些情况下，当使用患者来源的起始材料时，可能建议对自体CAR T细胞进行额外的生产工艺开发。

收集细胞起始材料后，FDA不要求在CAR T细胞生产中使用经批准的医疗设备。生产设备（如离心/清洗、选择或孵化设备，包括自动化设备）的适用性应在所选操作模式和特定设备设置下评估产品的CQA来确定。该资格由IND申请人负责，而非医疗器械或设备制造商。生产设备的运行参数应验证以支持BLA。

如果描述辅料、载体、生产设备、生产工艺或生产设施的信息已经提交给FDA（例如，在另一个IND、研究设备豁免（IDE）或主文件（MF）），文件持有人授权FDA交叉引用之前提交的CMC或其他信息的信函可用于支持IND。申请人应说明交叉引用的信息以及交叉引用文件中包含的信息。任何DS、DS中间体和DP信息都应包含在BLA中，且不应通过引用MF合并。

贯穿开发过程，应确定CPP，并将其用于建立过程中控制。例如：

•在激活阶段使用固定的磁珠：细胞比。

•在转基因步骤中，每个细胞使用恒定量的载体（例如，病毒载体的固定感染倍数）和固定的持续时间。

•使用固定的电穿孔设置。

•监测培养中的细胞扩增，并通过添加培养基保持最佳细胞密度。

在相关时间点进行适当的过程中测试对于实现和保持对生产过程控制至关重要。CAR T细胞的过程中测试方案通常评估多个参数（例如，活力、细胞数量、细胞表型、CAR表达）。过程中的测试结果可用于指导关键步骤的生产决策，例如何时更换培养基或确定何时准备收获CAR T细胞。

FDA建议对CAR T细胞进行稳定性研究，以支持GT CMC指南V.A.7和V.B.8中所述的保持和储存时间。请注意，如果计划使用新鲜CAR T细胞，建议提供最终配方产品和给药之间预期保持时间的稳定性信息。由健康供体材料制成的产品可能无法准确反映自体CAR T细胞的稳定性；因此，建议将患者材料制成的产品纳入稳定性研究。

2.CAR T细胞分析检测

必须对CAR T细胞进行分析检测，以确保试验产品的安全性、特性、质量、纯度和强度（包括效力）。GT CMC指南V.A.4和V.B.5提供了DS和DP分析测试的一般建议。V.A.4.b.i包括药典测试替代方法的建议。V.A.5.b.i包括对新鲜制备细胞产品的建议，或在最终配方和患者给药之间有限保持时间内使用的细胞产品的建议。

CAR T细胞分析检测通常需要复杂的分析和产品特定的生物分析开发。因此，FDA建议申请人在CAR T细胞开发早期阶段开始分析开发，并使用各种分析来表征其产品。提交临床1期IND通常不需要验证分析程序；然而，FDA建议提供信息证明对测试方法控制适当。一般来说，应采用科学合理的分析性能原则（即，试验应特异、敏感、可重复，并包括适当的控制或标准）。FDA建议在适当时候使用药典方法，并且在开始临床研究前，安全相关测试应该是合格的。在启动旨在提供有效性的主要证据以支持上市申请前，每个分析都应经过鉴定，并且必须对分析进行验证以支持BLA。

改变分析时，应进行风险评估，以确定分析改变如何影响CAR T细胞评估。如果分析方法有重大变化，建议重新鉴定分析，以确保分析性能特征保持可接受。如果用以相同方式测量相同属性的新方法替换（例如，更换为另一家供应商的ELISA试剂盒），则该分析应鉴定合格，并可能要求进行研究以证明新分析产生的结果与旧分析相同。FDA建议这些研究包括用新旧分析对相同的检测样本进行分析。如果用一种以根本不同的方式测量属性的新分析方法（例如，效价分析从细胞杀伤分析改为细胞因子释放分析）替换，则新的分析方法应鉴定合格，并应提供分析接受标准相关变化的理由。

a、流式细胞术

流式细胞术可以在整个生产过程中评估多种CAR T细胞属性（例如，细胞活力、特性、纯度、强度）。在开发过程中使用的流式细胞术应科学合理，并提供可靠和可重复的结果。

ⅰ、FDA建议提交初始IND时，包括：

-分析说明，包括流式细胞抗体组合和用于确定检测到的每个细胞群的门控策略。活/死染色应包括在流式细胞组合中。建议收集最终产品中相关细胞群信息，包括预期不会产生治疗效果的细胞（如残留肿瘤细胞，如适用）。-仪器校准和QC相关信息，以确保结果的准确性。

-分析控制清单。控制可能包括：用于计算补偿值的单染色补偿控制；荧光负一（FMO）控制，以确定小种群的荧光扩散和选通边界；和同型对照以确定非特异性结合。贯穿分析开发，应确定每个控制的系统适用性标准。

ⅱ、作为分析开发的一部分，FDA建议建立并实施书面程序，以确保正确的样本染色、采集和数据分析。此外，建议进行抗体滴定以确定最佳抗体稀释度。

ⅲ、FDA建议直接检测CAR，以确定CAR阳性细胞的百分比。如果通过替代蛋白表达（如检测共表达基因）或其他广泛特异性试剂（如蛋白L）检测到CAR，则应证明与CAR表达的相关性。替代标记物的敏感性和特异性的证明应作为使用理由的一部分。

ⅳ、必须进行批次放行流式细胞术的综合验证研究，以支持上市。该验证研究应按照ICH Q2进行，并验证用于CAR T细胞放行的流式细胞组合中每个荧光标记物。稳健性研究应包括确定染色前以及染色和采集之间样品的最大保持时间。应提供所有执行验证研究的用户的培训记录。

b、载体拷贝数（VCN）

转基因整合可能改变细胞基因的表达，并导致致瘤性。因此，DP中的转基因整合是衡量CAR T细胞放行的重要安全参数。如果载体系统指导转基因整合，则应确定每个CAR阳性细胞的平均整合数，通常称为VCN，并在每个批次的分析证书（COA）上报告。确定VCN作为总细胞数函数，包括分母中的非转导细胞和降低报告的载体整合率。用CAR阳性细胞百分比，可以计算每个CAR表达细胞的平均VCN。VCN作为CAR表达细胞的功能将在转导细胞中提供更准确的VCN表达，从而更准确地表达插入突变的产品风险。建议优化转导过程以控制VCN，同时满足目标转导频率。

FDA建议通过经验确定VCN放行标准，并根据风险评估进行论证。风险评估可能包括来自研究的支持性数据，如插入位点分析、克隆优势、剂量、适应症、研究人群等。支持性实验数据可能来自多个工艺生产批次。

某些案例中，例如在未经扩增培养的情况下生产的CAR T细胞，在批次放行测试时确定稳定整合的VCN可能很困难（例如，由于非整合载体的游离拷贝持续存在）。这种情况下，可能需要在批次放行时进行临时VCN评估，然后对培养的CAR T细胞进行后续VCN评估，以确定稳定整合的VCN。

c、鉴定

在开发的所有阶段都需要进行鉴定，并且必须对用于上市申请的最终产品进行鉴定。鉴定应充分识别产品，并将其与同一设施中的其他产品区分开来。值得注意的是，FDA建议对CAR T细胞的鉴定试验包括测量转基因存在的试验（例如，通过流式细胞检测CAR表达，通过PCR检测基因）和针对最终产物的细胞成分（例如，细胞表面标记物）的特异性试验，如GT CMC指南V.B.5.b.ii所述，HLA分型可用于自体CAR T细胞；然而，HLA分型并不能检测基因修饰，因此，这不是一个充分的身份测试。此外，HLA分型无法取代维护鉴定链的要求。

d、效力

载体和CAR T细胞DP都必须测试效力。结合抗原后，CAR T细胞通过多种机制杀死靶细胞。因此，可以建议使用矩阵筛选法来测试效力（例如，细胞杀伤试验、转导效率测定和细胞因子分泌试验）。FDA建议在产品开发过程中使用正交方法来表征CAR T细胞功能。这种方法将支持可比性研究，并可确定用于商业批次放行的最佳分析矩阵。

3. CAR T细胞的标签

IND必须包含临床研究中提供给每位研究者的所有标签和标签副本。FDA建议在CTD模块1中加入样本或标签模型。注意，IND产品必须贴上标签，并注明“警告：新药——受美国法律限制用于研究用途”。FDA建议标签包括产品名称、制造商信息以及“请勿过滤”和“请勿辐照”警告。获批CAR T细胞的标签必须符合21 CFR 201和21 CFR 610 G章节要求，以及FD&C Act中其他适用规定。

附加标签对自体CAR T细胞至关重要。用自体起始材料制造的CAR T细胞必须贴上“仅供自体使用”的标签。标签还应包括至少两个唯一标识符，以在给药前确认患者身份。

根据对自体起始材料进行的供体检测和筛查，自体CAR T细胞的标签必须注明“未评估感染性物质”，除非已根据21 CFR 1271.75、21 CFR 1271.80和21 CFR 1271.85（21 CFR 1271.90(c)(2)）进行了所有其他适用的筛查和检测。如果进行的筛查或测试结果表明存在相关传染病病原体和/或相关风险因素或临床证据，则CAR T细胞也必须贴上21 CFR 1271.3(h)中所示的生物危害图例。对于反应性试验结果，标签上还必须注明“警告：反应性试验结果（病原体或疾病名称）”。

如果CAR T细胞表达多个转基因元件，则效价测定应测量每个功能元件的活性。例如，如果CAR T细胞除CAR外还包含一个转基因细胞因子，除了评估CAR活性的效价分析外，还应开发一种效价分析来评估该细胞因子的活性。

D.CAR T细胞产品生命周期内生产变更管理和可比性评估

在产品开发或批准后，CAR T细胞的设计、生产工艺或生产设施可能会发生变化。CAR T细胞产品生命周期中的变化，包括最终容器、培养过程中使用的细胞因子或细胞扩增持续时间的变化，都可能会影响产品质量、安全性、功效或稳定性。有些变化（例如，CAR结构的变化或从自体产品到异体产品的变化）通常会导致新产品应该提交新IND。

每项变更应根据具体情况进行评估，FDA建议申请人在考虑此类变更时与OTAT沟通（例如，通过IND修正案征求意见或正式会议请求）。在规划此类变更时，一般建议申请人考虑以下事项：

•载体生产过程的重大变化（例如，从贴壁培养到悬浮培养）应得到可比性研究的支持。由于载体在CAR T细胞活性中的重要作用，应评估此类变化对载体和CAR T细胞的影响。研究应包括对变化前后载体的并行分析。此外，应使用相同的细胞起始材料（例如，从同一供体分离白细胞起始材料），通过并行分析来评估用改变前和改变后载体生产的CAR T细胞。

•可比性评估的复杂性可能因CAR T细胞生产工艺的变化程度而异。例如，生产CAR T细胞的培养基体积的微小变化通常可以由细胞活力和扩增数据支持。相比之下，对于培养基中生长因子或添加物浓度或类型的变化，应进行更稳健的可比性研究。

•当CAR T细胞或载体生产设施发生变化时，应建立生产设施之间的可比性，以确保试验产品的性质不会发生改变，以免禁用临床前数据支持临床研究，或无法结合每个生产点的产品产生的临床数据。

1. 变更管理

在实施任何变更前，应进行风险评估，以评估预期变更对产品质量和安全的潜在影响。了解变化的影响对于评估并合并变化前后产生的临床数据的能力至关重要。该风险评估应基于不适用于患者的开发批次生成的经验数据。该风险评估应告知是否需要进行分析性可比性研究。此外，产品开发阶段可能会影响是否需要进行分析性可比性研究。对于在早期开发阶段实施的变更，主要考虑应避免对产品安全产生负面影响。

然而，考虑在产品开发的后期进行变更时，申请人应评估变更对安全性和有效性的影响。根据变更类型，还应考虑产品稳定性评估。必须提交对CMC信息的更改，作为对IND的修订。FDA建议在启动可比性研究或实施变更之前，将拟议变更的细节、伴随的风险评估和拟议变更管理策略作为修订提交到IND。

可根据ICH Q5E中描述的一般原则，评估CAR T细胞变化前后的分析可比性。注意，术语“可比性”并不一定意味着变更前和变更后的产品是相同的，但它们非常相似，产品CQA的任何差异都不会对CAR T细胞的质量、安全性或功效产生不利影响。证明分析可比性的一个关键作用是确保变更前产生的临床数据继续与变更后产品的安全性和有效性相关。如果没有足够的证据证明分析的可比性，则可能需要进行新的非临床或临床研究，这可能会推迟产品批准。在开始分析可比性研究和数据分析之前，FDA建议申请人与OTAT讨论研究设计和验收标准。在某些情况下，变更可能会改变在分析检测中无法充分测量的CQA。在这种情况下，分析性可比性研究不足以评估可比性。因此，FDA建议申请人预测建立一个可扩展且稳健的生产流程需要的变更，并在启动临床研究之前进行变更，这些临床研究旨在提供有效性的主要证据，以支持上市申请。

无论产品开发阶段如何，必须更新IND以反映生产过程的变化（生产工艺变更被视为需要信息修正的新化学信息）。如果开发后期变更，且没有支持BLA的额外临床研究计划，则分析可比性研究应与批准产品进行的研究一样全面和彻底。CQA的差异可能需要新的非临床或临床研究。

对于批准产品，生产变更必须在现有变更控制程序的范围内进行。此类程序的设计应确保制造变更不会影响CAR T细胞质量。如果提议更改产品放行标准，根据IND生成的临床数据可能被要求支持变更后产品的安全性和有效性。

2.可比性研究设计

FDA建议，可比性研究设计应包括以下理由，即拟议的分析方法适用于检测变更对产品安全性和有效性的潜在影响。用拟议变更生产的产品能满足当前放行标准的证明通常不足以建立可比性。可比性研究应使用适当的统计方法和预定义的验收标准进行分析，这些标准基于安全有效的批次。

建立CQA的早期产品特征有助于设计可比性研究。在整个CAR T细胞开发过程中使用各种表征分析，可以更好地理解产品，并支持评估可能受拟议生产变更影响的质量属性。例如，可能会建议改变用于CAR T细胞培养的细胞因子以改变细胞扩增率。然而，这种变化也可能影响细胞亚群和激活状态。因此，除了进行批次放行测试的属性外，还应使用可靠的分析方法监测各种产品属性，包括细胞表面标记。

一些CAR T细胞属性与细胞起始材料属性有内在联系。由于自体CAR T细胞的细胞起始材料固有的变异性，使用历史批次来评估可比性可能不够。FDA建议尽可能使用相同的细胞起始材料，通过并行测试来评估CAR T细胞的可比性。例如，来自同一供体的白细胞分离起始材料可分为两部分，一部分用变更前工艺生产产品，另一部分用变更后工艺生产产品。在某些情况下，可使用来自健康供体的CAR T细胞进行可比性研究。然而，如果由健康供体生产的产品不足以评估自体CAR T细胞的产品可比性，可比性研究应包括对由患者细胞起始材料生产的CAR T细胞的评估。E.单中心或多中心生产

1.单点生产

CAR T细胞可以在一个工厂生产。这种情况下，收集细胞起始材料（例如，用于白细胞分离（起始材料）单采中心），并将其运送集中生产点生产CAR T细胞。CAR T细胞随后被运送到本地或远程临床地点进行给药。单点生产可能降低因设施之间差异而产生的产品可变性。然而，细胞起始材料、最终CAR T细胞和测试样本的冷冻保存或运输可能存在后勤问题。

2.多中心生产

同一类型的CAR T细胞可以在多个工厂生产。多中心生产可以缩短从细胞起始材料收集到自体产品给药时间；然而，制造设施之间差异可能会导致产品可变性。这种情况下，申请人应该证明在每个中心生产的产品有可比性，以支持临床试验结果分析。申请人还应证明，如果适用，不同中心的分析方法具有可比性。

IND申请人有责任确认每个生产现场都遵循CGMP。FDA建议在可能的情况下，在整个生产设施中使用相同的标准操作程序（SOP）、培训、试剂和设备。FDA还建议IND描述各生产场所制造过程中的任何差异。

定义产品质量属性的验收标准将有助于支持在生产现场生产类似产品。FDA建议提交数据，最好是来自使用相同细胞起始材料在每个中心进行鉴定，以证明每个中心生产的产品的分析可比性，包括用于测试的方法列表和用于确定分析可比性的预定义验收标准。在评估多个生产中心间的分析可比性时，FDA建议确定一个中心作为参考，并将所有中心与之进行比较。此外，如上文所述，如果将相应的临床数据结合起来进行疗效分析，则证明不同生产地点生产的产品之间的可比性至关重要。

3.多中心测试

多中心生产经常与多个测试点执行相同分析相关联。例如，流式细胞术通常在收获DS时进行，因此可能要在每个生产设施相关的分析实验室进行。这种情况下，FDA建议使用分析转移方案以确保在每个测试点进行的非药典试验适用于预期目的，并且在所有测试间可重复。

FDA建议在可能的情况下，在测试点中使用相同的SOP、试剂和设备。如果可行，用标准材料在各测试点校准设备，以支持仪器一致性。对于药典分析，通常不需要证明各测试点的重现性；然而，重要的是要验证每个测试点都能按预期进行检测。