原创|双胍

20222月28日，传奇生物靶向B细胞成熟抗原（BCMA）的CAR-T西达基奥仑赛的疗法（CARVYKTI^?）申请生物制品许可证(BLA)正式获FDA批准用于治疗复发/难治性多发性骨髓瘤（r/r MM）病人，成为第一个获得FDA批准的国产CAR-T细胞疗法。2022年3月24日，欧洲药品管理局（EMA）人用药品委员会（CHMP）采纳积极意见，建议传奇生物CARVYKTI授予有条件的上市许可证。

CARVYKTI活性成分为ciltacabtagene autoleucel（也叫cilta cel；JNJ-68284528或LCAR-B38M CAR-T细胞)，一种基因修饰自体T通过慢病毒载体细胞，通过慢病毒载体，（LV）体外转基因、靶向、靶向B细胞成熟抗原（BCMA）。BCMA主要表现为恶性多发性骨髓瘤B系细胞，晚期B细胞和浆细胞表面。和表达。BCMA细胞结合后，CAR促进T细胞活化、扩增和靶细胞清除。

笔者总结了前五名FDA批准的CAR-T疗法（KYMRIAH、YESCARTA、TECARTUS、BREYANZI、ABECMA）非临床研究涵盖项目，可以发现CAR-T申请作为基因修饰细胞治疗产品，申请IND和NDA非临床研究与小分子化药和大分子生物药有很大的不同。KYMRIAH、BREYANZI和ABECMA利用肿瘤异种移植小鼠模型检查疗效，YESCARTA和TECARTUS使用同源小鼠模型(鼠源肿瘤和鼠源肿瘤)CAR-T）。同时，前5个CAR-T产品没有进行传统的毒理学研究。

2021年11月30日，CDE颁布《基因修饰细胞治疗产品非临床研究技术指导原则（试行）》CAR-T基于目前的科学认知，对产品进行非临床研究和评价提出了特殊的考虑和要求。

下面笔者将根据最新批准的情况，作者将CARVYKTI披露材料，看看传奇CAR-T在进入临床试验之前，细胞产品进行了哪些非临床研究？是否与否？CDE相关指导原则一致？

CARVYKTI作用机制

体内药理学研究表明，在植入人类多发性骨髓瘤细胞的免疫缺陷小鼠中，给予多发性骨髓瘤细胞免疫缺陷LCAR-B38M CAR-T细胞后，具有显著的剂量依赖性抗肿瘤活性，并提高了存活率。肿瘤再次刺激后，肿瘤生长没有增加。

体外数据表明，■与表达于■细胞重组小鼠或非人灵长类（NHP）BCMA没有明显的结合。因此，评价。CARVYKTI由于缺乏与药理学相关的动物物种，安全动物研究受到限制。

《基因修饰细胞治疗产品非临床研究技术指导原则（试行）》：非临床试验时，应选择相关动物种属/模型。理想情况下，基因修饰细胞应能以预期的作用方式在所选动物中表现出拟用动物所期望的功能活性。每种动物种属/模型都有其优缺点，应对非临床研究所采用的动物种属/模型与人体的相关性和局限性进行评价和阐明

体外药理学研究

CARVYKTI暴露于表达BCMA多发性骨髓瘤细胞后，显示肿瘤细胞毒性和释放细胞因子，BCMA针对人类的靶向结构BCMA肿瘤/靶向特异性。未观察到。cilta cel细胞和内源性表达■的健康供体（HD）特异性结合衍生髓样细胞。

申请人提供18项体外研究支持IND申报，包括研究#1和#2对于最终临床产品，结果为最佳结构的选择提供了全面的支持。#3、#5、#6、#11、#14、#15、#17和#18未披露。

研究#4不同的供应系统LCAR-B38M CAR-T体外■细胞毒性试验

研究#7LCAR-B38M CAR-T对人类细胞系细胞毒性的体外研究

研究#8LCAR-B38M CAR-T体外研究与人细胞系共培养和释放细胞因子(测量研究)#7上清液中收集的细胞因子IFN-γ和TNF-α水平）

研究#9BCMA外结构和LCARB38M-CAR结合研究(测量重组人)BCMA-ECD与LCAR-B38M-CAR-T细胞结合亲和力)

研究#10BCMA靶向结构领域的正常组织结合谱(分析了三个健康个体获得的一系列正常组织。用纯化的一级抗体检测细胞膜上的细胞BCMA的表达）

研究#12用■评估CAR T细胞结合谱(分析筛选抗阻抗结合谱(BCMA CAR T细胞是否有脱靶结合)

研究#13用■评估JNJ-68284528结合谱

研究#16JNJ-68284528 CAR-T细胞的体外药理学特征

基因修饰细胞治疗产品非临床研究技术指导原则（试行）：当缺乏相关动物模型时，可以使用基于细胞和组织的模型，也可以为有效性和安全性的评估提供有用的补充信息。基因修饰细胞治疗产品应进行概念验证试验，阐明细胞基因修饰的原因和可行性。概念验证试验包括体外和体内试验。CAR修饰后的免疫细胞应通过体外方法深入分析靶抗原在人体器官、组织和细胞中的表达进行深入分析。基因表达分析数据库和文献研究也可能有助于澄清靶抗原在不同病理和生理状态下的表达是否不同。表达和不表达靶抗原的细胞应作为靶细胞进行体外试验，以确认CAR-T该产品可以特异性地识别和杀死靶细胞。并采用体外方法（如人质膜蛋白阵列技术等）评估其外抗原识别区（一般为抗体单链可变区）与人体膜蛋白脱靶结合的风险。

体内异种移植瘤动物模型研究

研究#19LCAR-B38 CAR-T对移植■免疫缺陷小鼠剂量增加研究

研究#20LCAR-B38M对移植■免疫缺陷小鼠体内功效研究

基因修饰细胞治疗产品非临床研究技术指导原则（试行）：基因修饰细胞（如与疾病环境相互作用的基因修饰细胞）CAR-T细胞)，可能需要使用疾病模型动物。

安全药理学研究(未进行)

药代动力学研究(生物分布)(未进行)

《基因修饰细胞治疗产品非临床研究技术指导原则（试行）》：利用相关动物模型进行药代动力学试验，阐明基因修饰细胞在体内的命运和行为（包括生物分布、归巢、定植、增殖、分化和可持续性）。这些试验可以单独进行，也可以集成到概念验证试验和/或毒理学试验中

毒理学研究

研究#21LCAR-B38M在■猴子体内的试验耐受性(使用的)CAR-T细胞来源于NHP自体T细胞，2只猴，无对照组)

申请人指出，cilta cel在NHP中不会与BCMA交叉反应，因此，评估NHP潜在靶向/非肿瘤毒性对中国衍生产品的价值有限。在小鼠和小鼠中。NHP体内研究未发现任何不良发现，表明人类靶外不良反应的风险较低。

DART研究

申请人没有传统DART研究。由于多发性骨髓瘤主要发生在老年患者中，在40岁以下患者中很少见。#10结果表明，在人类女性或男性生殖器官中没有检测到BCMA结合域。另外，没有■细胞上表达的重组小鼠或NHP BCMA结合（研究#6和#18），表示啮齿动物和NHP不用于检测cilta细胞药理学相关物种。

致癌性/致瘤性研究(未进行)

遗传毒研究

研究#22：慢病毒载体整合位点分析（ISA）检测输注前JNJ-68284528自体抗BCMA嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞(药)(药)

申请人没有进行传统的基因毒性试验和致癌性评估，但评估了LV导致插入突变的风险。结果表明，LV用于生产CARVYKTI，与致癌转化相关的特定基因组位点或附近不会优先整合。此外，6名多发性骨髓瘤患者和3名多发性骨髓瘤患者和3名多发性骨髓瘤患者HD患者生产的CARVYKTI细胞没有不受控制的细胞增殖迹象。因此，它被认为是理由。LV致癌转化的风险很小。

其他安全/毒理学研究

研究#23：JNJ-68284528细胞因子非依赖性生长的体外鉴定

结果：未观察到JNJ-68284528在缺乏细胞因子的情况下增殖。

【研究#22，#23对《基因修饰细胞治疗产品非临床研究技术指导原则（试行）》中提到的插入突变风险进行评估。